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液相色譜儀測(cè)定葛根素含量

 更新時(shí)間:2017-03-14 點(diǎn)擊量:2957

葛根為豆科植物野葛 Pueraria lobata (Willd.) Ohwi的干燥根,是常用中藥材,具有解肌退熱,生津,透疹,升陽(yáng)止瀉功效,用于外感發(fā)熱頭痛、項(xiàng)背強(qiáng)痛,口渴,消渴,麻疹不透,熱痢,泄瀉,高血壓頸項(xiàng)強(qiáng)痛等[1]。現(xiàn)代研究證實(shí),葛根中的主要有效成分為葛根素等異黃酮類化合物,具有抗炎解熱、擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈血管、增加冠狀動(dòng)脈血流量的作用,同時(shí)也有降低血壓的作用。有關(guān)葛根中葛根素等異黃酮的含量測(cè)定研究已有不少報(bào)道[2-5],但對(duì)葛粉中葛根素含量測(cè)定報(bào)道不多。本文對(duì)葛粉中葛根素的提取條件和測(cè)試條件等進(jìn)行比較研究,并采用液相色譜法對(duì)葛粉樣品進(jìn)行了定量分析, 結(jié)果令人滿意。

 

    1 實(shí)驗(yàn)部分

 

    1.1 儀器與試劑

 

    LC-10tvp液相色譜儀;SPD-10T紫外檢測(cè)器;N2010色譜工作站,島津UV-265紫外分光光度儀,多功能榨汁機(jī)/攪拌機(jī)SG300-I。甲醇(色譜純),水(二次蒸餾),其余均為分析純。葛根素對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所);鮮葛。

 

    1.2 色譜條件

 

   用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;色譜柱Vertex C18 (150×4.6mm I.D),MeOH-H2O-HAc(30:70:0.5)為流動(dòng)相,紫外檢測(cè)波長(zhǎng)250nm。

 

    2 結(jié)果與討論

 

    2.1 提取溶劑濃度的選擇

 

   精密稱取同一樣品約0.1g,分別加30%乙醇、50%乙醇和80%乙醇10ml,超聲提取60分鐘,進(jìn)樣5ul,比較峰面積,實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明30%乙醇提取。

 

    2.2 超聲提取時(shí)間的選擇

 

   精密稱取同一樣品約0.1g,分別加30%乙醇10ml,超聲提取30分鐘、45分鐘、60分鐘,進(jìn)樣5ul,比較峰面積,實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明超聲60分鐘為*提取條件。

 

    2.3 流動(dòng)相及流速的選擇

 

    試驗(yàn)時(shí)曾采用下述流動(dòng)相進(jìn)行測(cè)定:甲醇-水(25:75)、甲醇-水-醋酸(30:70:0.5)、甲醇-水(30:70)為流動(dòng)相,結(jié)果采用甲醇-水-冰醋酸(30:70:0.5)為流動(dòng)相,樣品分離好。而流速也以1.0ml/min為合適。

 

    2.4 標(biāo)樣溶液的制備

 

   稱取一定量葛根素對(duì)照品,用30%乙醇溶解配制成濃度為13ug/ml的葛根素標(biāo)準(zhǔn)液。

 

    2.5 葛粉制備

 

   取鮮葛用水洗凈切片,稱取20g放入攪拌機(jī)內(nèi),攪拌三次,每次1分鐘,每次加水200ml, 150ml,100ml,合并漿汁放置二天,去掉上面的水,下面的粉漿用定量濾紙過(guò)濾,低溫干燥,放入干燥器中備用。

 

    2.6 供試品溶液制備

 

   稱取一定量葛粉于10mL容量瓶中,加30%乙醇10ml,超聲提取1h,濾紙過(guò)濾,濾液過(guò)0.45um濾膜作為供試品溶液。

 

    2.7 線性關(guān)系考察

 

    在上述色譜條件下,分別進(jìn)標(biāo)樣溶液0.5、3、5、7、10μl,測(cè)得各峰面積。以葛根素為橫座標(biāo)(A),以峰面積(Y)為縱座標(biāo),計(jì)算得回歸方程:Y=3.90×106x+728.14,相關(guān)系數(shù)r=0.9999;結(jié)果紫外檢測(cè)葛根素在0.0065-0.13μg范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系。

 

    2.8 精密度試驗(yàn)

 

   取上述標(biāo)樣溶液,連續(xù)進(jìn)樣5次,測(cè)定,RSD為1.11%。

 

    2.9 重復(fù)性試驗(yàn)

 

   取同一樣品重復(fù)測(cè)定5次,RSD為1.61%。

 

    2.10 穩(wěn)定性試驗(yàn)

 

   取上述供試品溶液,0、2、5、7、10h進(jìn)樣,RSD為2.1%,10小時(shí)內(nèi)進(jìn)樣穩(wěn)定。

 

    2.11 回收率試驗(yàn)

 

    取已知含量的樣品,分別加入葛根素標(biāo)樣,按上述方法測(cè)定5次,平均回收率為98.6%, RSD為1.76%。見(jiàn)表1。

 

    2.12 樣品分析

 

   精密吸取標(biāo)樣溶液5μl與供試品溶液5μl,注入液相色譜儀,測(cè)定,結(jié)果:葛粉中葛根素的含量為0.06%(n=3),見(jiàn)下圖。

 

    3 討論

 

   本文采用液相色譜法測(cè)定葛粉中葛根素的含量,方法簡(jiǎn)單、快速、準(zhǔn)確,結(jié)果滿意,可用于葛粉中葛根素的含量測(cè)定。

 

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